Hoja de referencia rápida · Protocolo visual · Tipos de sonda — para entregar a los estudiantes
| PATRÓN DE SEÑALES | DESCRIPCIÓN | INTERPRETACIÓN | EJEMPLO CLÍNICO |
|---|---|---|---|
| 2 señales idénticas | NORMAL — Diploide | Resultado esperado en célula sana | |
| 1 señal | DELECIÓN hemicigota | Síndrome DiGeorge (del 22q11), Prader-Willi | |
| 0 señales | DELECIÓN homocigota / falla técnica | Verificar control interno antes de reportar | |
| 3 señales | TRISOMÍA / duplicación | Trisomía 21 (Down), 18 (Edwards), 13 (Patau) | |
| ≥6 señales o clusters | AMPLIFICACIÓN génica | HER2+ en cáncer de mama (ratio HER2/CEP17 ≥2.0) | |
| Señal de fusión (amarillo/naranja) | TRANSLOCACIÓN / fusión génica | BCR-ABL en LMC, PML-RARA en LPA | |
| Señales alternadas separadas (break-apart) | NORMAL (sonda break-apart) | Sonda ALK normal — gen intacto | |
| Señal fusión + señales libres | TRANSLOCACIÓN en 1 alelo | Translocación heterocigota — frecuente en tumores |
Fijación MeOH:AcOH 3:1. Célula en interfase o metafase.
Goteo en portaobjetos. Secado al aire 37°C.
RNAsa 37°C 1h. Pepsina. Post-fijación formaldehído.
73°C en formamida 70% 5 min. ¡Temperatura crítica!
37°C overnight 12–18h. Sonda + muestra en cámara húmeda.
0.4× SSC 73°C 2 min. 2× SSC/0.1% NP40 T.A. 1 min.
Montaje con DAPI + antifading. Cubrir y sellar.
Microscopio fluorescente. ≥200 células en interfase.
| PROBLEMA | CAUSA | SOLUCIÓN |
|---|---|---|
| Sin señal (0 dots) | Sonda degradada, hibridación fallida, desnaturalización excesiva | Verificar control positivo; repetir con sonda nueva |
| Señal difusa / "neblina" | Lavado insuficiente, temperatura de hibridación incorrecta | Aumentar temperatura de lavado; aumentar stringencia SSC |
| Demasiadas señales (>4 en normal) | Reanudación de síntesis de DNA (célula en S); co-localización | Usar solo células en G0/G1; buscar separación de señales |
| Morfología celular destruida | Sobredesnaturalización (>75°C o >5 min) | Calibrar bloque calefactor; reducir tiempo de desnaturalización |
| Señal solo en algunos núcleos | Fijación heterogénea; mosaicismo real | Analizar ≥200 células; calcular % de núcleos afectados |
5 casos progresivos con historia clínica, imagen FISH representativa y respuesta razonada
Mujer de 38 años, embarazo gemelar dicoriónico. Amniocentesis indicada por edad materna. El laboratorio solicita FISH prenatal rápido para aneuploidías comunes mientras se cultiva el cariotipo.
¿Cuál es el diagnóstico para cada gemelo? ¿Qué conducta tomar? ¿Qué limitación tiene este resultado?
Las 3 señales del CEP 21 indican 3 copias del cromosoma 21. Los demás cromosomas son normales (diploides). Conducta: comunicar resultado preliminar y aguardar cariotipo confirmatario (2 semanas). Asesoría genética urgente. Limitación clave: FISH no descarta otras aneuploidías ni reordenamientos estructurales fuera del panel. El cariotipo es imprescindible.
Mujer de 45 años con carcinoma ductal invasor de mama. IHQ: HER2 2+ (equívoco). Se solicita FISH para definir si la paciente se beneficia de trastuzumab (Herceptin).
¿Es positiva la amplificación de HER2? ¿Cuál es el umbral diagnóstico? ¿Qué significa para el tratamiento?
Según guías ASCO/CAP 2018, se considera amplificación cuando el ratio HER2/CEP17 ≥ 2.0 o promedio HER2 ≥ 6 copias. Este caso cumple ambos criterios (ratio 3.4, promedio 7.2). Implicación: la paciente se beneficia de terapia anti-HER2 (trastuzumab ± pertuzumab). El CEP17 elevado (>3) puede indicar polisomía del cromosoma 17 — analizar caso a caso. Algunos tumores con polisomía pueden sobrestimararse; el contexto IHQ complementa.
Varón de 52 años con LMC diagnosticada hace 6 meses. En tratamiento con imatinib (Gleevec) desde el diagnóstico. Se solicita FISH de médula ósea para evaluar respuesta citogenética al tratamiento.
¿Qué patrón de señal tienen las células normales vs. las células LMC? ¿Cómo se interpreta el 8%? ¿Hay respuesta al tratamiento?
Patrón normal: 2 señales verdes (BCR) + 2 señales rojas (ABL), sin fusión. Patrón LMC: 1 verde + 1 roja + 1 señal de fusión amarilla/naranja (cromosoma Philadelphia: BCR-ABL). El descenso de 94% → 8% indica respuesta citogenética mayor (CCyR se define como <1%). Con 8% aún hay clon residual — ajuste de dosis o switch a dasatinib a considerar. Complementar con PCR cuantitativa (BCR-ABL/ABL% por IS) para seguimiento molecular más sensible.
Niño de 3 años remitido por dismorfias faciales, cardiopatía congénita (CIV), hipotonía, y retraso del lenguaje. Cariotipo GTG a 550 bandas: aparentemente normal. Clínico sospecha síndrome de microdeleción.
¿Cuál es el diagnóstico? ¿Por qué el cariotipo fue normal? ¿Qué otras regiones podrían estudiarse con FISH? ¿Qué implicaciones tiene para la familia?
¿Por qué el cariotipo fue normal? La deleción de 22q11.2 es de ~3 Mb — por debajo de la resolución del cariotipo convencional (~5-10 Mb). FISH detecta deleciones de hasta 100-200 kb. Otras regiones a estudiar: si FISH fuera negativo, considerar SNP-array para buscar otras microdeleciones (1p36, 4p, 5p, 7q11.23-Williams, 8p23, 9q34-Kleefstra, 17p11.2-SMS). Implicaciones familiares: estudiar a ambos padres con la misma sonda — 10-25% son heredados (padre/madre puede ser portador silente). Riesgo de recurrencia 50% si un progenitor es portador.
Adolescente de 16 años con masa en fosa poplítea de crecimiento rápido (3 meses). Biopsia: tumor de células pequeñas y redondas. HE: patrón bifásico. IHQ: positivo para TLE1, negativo para miogenina y CD99. El anatomopatólogo sospecha sarcoma sinovial. Solicita FISH.
¿Qué significa que las señales estén separadas? ¿Cuál es el diagnóstico? ¿Por qué se usa break-apart en vez de sonda de fusión directa? ¿Qué gen socio está implicado?
Señales separadas = gen roto: en condiciones normales, las dos mitades de la sonda (5'-verde y 3'-rojo) están juntas porque flanquean el mismo gen intacto. Cuando hay translocación, el gen SS18 se rompe y cada mitad va a un cromosoma diferente → las señales se separan. ¿Por qué break-apart? SS18 puede fusionarse con SSX1, SSX2 o SSX4 (genes en Xp11). Una sonda de fusión requeriría 3 sondas distintas; break-apart detecta cualquier reordenamiento de SS18 independientemente del socio. Diagnóstico final: Sarcoma sinovial con t(X;18)(p11;q11) confirmado por FISH. Correlaciona con presentación clínica, morfología e IHQ (TLE1+). Implicaciones: quimiosensible, pronóstico intermedio.